مقاله روش تراریختی ژنتیکی پلی اتیلن گلیکول-القایی باکتری ها و مخمر

مقاله دانلودی فوق دارای فرمت ورد و قابل ویرایش همراه با متن اصلی با عنوان روش کلی برای تراریختی (انتقال) ژنتیکی پلی اتیلن گلیکول-القایی باکتری ها و مخمر می باشد که در زیر بخشهایی مختلف از متن آن جهت نمونه آورده شده است.

A general method for polyethylene-glycol-induced genetic transformation of bacteria and yeast

یک روش کلی برای تغییر ژنتیکی ناشی از پلی اتیلن گلیکول باکتریها و مخمرها

خلاصه

پلی اتیلن گلیکول (PEG) می تواند تراریختی ژنتیکی را در باکتری (اشرشیاکلی) و مخمر (Saccharomyces cerevisiae) بدون حذف دیواره سلولی، القا کند. تراریختی با واسطه PEG اشرشیا کلی از لحاظ فنی ساده است و بازده تراریختی با بهره وری میکروگرم در DNA وجود دارد. تجزیه و تحلیل دقیق از پارامترهای دخیل در تراریختی با واسطه PEG از اشرشیا کلی تفاوت اساسی بین PEG و روش استانداردCaCI2 برای تراریختی اشرشیا کلی را نشان می دهد. تراریختی با واسطه PEG مخمر به مراتب ساده تر از روش پروتوپلاست موجود و قابل مقایسه از نظر بهره وری است. روش های جدید برای تراریختی ژنتیکی با واسطه PEG که در اینجا شرح داده شده، ممکن است ابزار کلی را در انجام تراریختی ژنتیکی در یک طیف گسترده ای از موجودات زنده به اثبات برساند

...

نیاز برای تراریختی ژنتیکی با واسطه PEG

در بخش قبل، تجزیه و تحلیل پارامترهای دخیل در تراریختی با واسطه PEG (شکل I-6) ارائه شد. جدول II اهمیت نسبی هر مرحله را در این روش نشان می دهد. حذف DNA یا PEG به طور کامل، عملکرد ترانسفورم را لغو کرد و یک کاهش قابل توجه ترانسفورمانت مشاهد شد هنگامی که سوربیتول یا یون منیزیم از محلول SAM (جدول2) حذف شد. اگر شستشو نهایی توسط جریان سانتریفیوژی حذف شود، 76% تعداد شاهد ترانسفورمانتها بازیابی خواهد شد. حذف آخرین مرحله سانتریفوژ روش کلی ساده بدون کاهش بزرگ در بهره وری است.

بسیاری از گونه های مهم ژنتیکی قادر نیست، در شرایط طبیعی، تراریختی ژنتیکی را تحمل کند. با این حال، پروتوپلاست از اشرشیا کلی و چند گونه دیگر باکتریایی می توانند تراریختی ژن با واسطه DNA و ترا آلودگیرا انجام دهند. به همین نحو، حذف دیواره سلولی مخمر توسط هضم با زیمولیازاجازه جذب موفق DNA را می دهد. روش های دیگر که اجازه تراریختی موجودات بی کفایت را می دهد شامل تیمار CaCI2، شوک اسمزی، انجماد و ذوب، رشد در محیط کشت هیپرتونی، تیمار پنی سیلین، و قرار گرفتن در معرض پلیمر پایه می باشد.

تشکیل پروتوپلاست به طور کلی در بازده بالاتر از ترانسفورم/ میکروگرم DNA نسبت به روشهای به کارگیری سلول های سالم و دست نخورده و یا تاحدی دست نخورده نشات می گیرد. با این حال، به دلیل سادگی آن و عملکرد نسبتا بالای ترانسفورمانت (تغییر یافته ها) ، روش CaCI2 مندل و هیگا ، 1970، یک روش استاندارد است. پیشرفت های اخیر روش CACI 2 شامل افزایش زمان قرار گرفتن در معرض CaCI2، علاوه بر این،کلرید روبیدیوم، گنجاندن دیتیوتریتول، کبالت هگزامین (III) و DMSO به علاوه یک پروتکل یخ در حال آب شدنو بهینه سازی شرایط است. متاسفانه، تکنیک معادل با روش باکتری CaCI2 اشرشیا کلی برای تراریختی ژنتیکی در بسیاری از گونه های مهم ژنتیکی وجود ندارد. در این گزارش، یک روش به کارگیری پلی اتیلن گلیکول شرح داده شده است که یک عملکرد بالا در ترانسوفرمانت موجودات پروکاریوتی و یوکاریوتی بدون هضم دیواره سلولی دارد.

بحث

اشرشیا کلیو مخمر، S. cerevisiae را می توان به طور ژنتیکی با روش های کاملا مشابه توسط پلی اتیلن گلیکول تراریخته نمود. بهره وری تراریختگی به دست آمده با روش PEG برای باکتری اشرشیا کلی در اینجا شرح داده شده با بهره وری روش استانداردCaCI2 برای تراریختی باکتری اشرشیا کلی(مندل و هیگا، 1970) مقایسه شد. در حالی که روشها دارای عملکرد مخمر protoplasted103-104 ترانسفورم/ میکروگرم DNA است (استروهل و همکاران، 1979؛ بروچ و همکاران، 1979)، روش PEG در اینجا برای مخمر، یک عملکرد200-1000 ترانسفورمانت برای هر میکرو گرم DNA بدون هضم دیواره سلولی توصیف نمود. بنابراین، روش PEG برای مخمر، هنگامی که تعداد بسیار زیادی از ترانسفورم مورد نیاز نمی باشد. روش انتخابی می باشد.بهره وری روش تراریختی با واسطه PEG برای اشرشیا کلی که در اینجا گزارش شده، قابل مقایسه با آنچه که با استفاده از روش CaCI2 به دست آمده، است. بازده تراریختی 106-107 ترانسفورمانت/ در هر میکروگرم DNA با روش CaCl2 مشاهده شده است ...

...